一、 實驗儀器與試劑
表格一：實驗儀器
儀器 | 廠家 | 型號 |
細胞培養(yǎng)箱 | Thermo Scientific | HERA cell CO2 |
酶標儀 | Thermo Scientific | Multiskan Spectrum |
表格二：試劑
試劑 | 廠家 |
DMEM/F12 培養(yǎng)基 | Gibco |
MTT | Sigma |
胰酶 | 索來寶 |
DMSO | Sigma |
二、 實驗步驟
收集生長狀態(tài)良好的神經(jīng)干細胞，消化并調(diào)整細胞懸液濃度，分于 96 孔板，
每孔 100μL，5000 個細胞/孔。
細胞置于 37 ℃、5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)過夜后，小心棄去培養(yǎng)基。
根據(jù)藥物在細胞溶液中的終濃度使用細胞培養(yǎng)液配制相應(yīng)的藥物儲備液，隨后加入至相應(yīng)培養(yǎng)液中形成不同濃度的工作液（藥物在工作液中的體積比為 5%）。每孔細胞分別加入 100μL 相應(yīng)的工作液，每種濃度均設(shè) 3 個復孔。同時設(shè)置正常培養(yǎng)孔（只加入*培養(yǎng)液培養(yǎng)的細胞）和空白孔（沒有細胞，只加入相同量的*培養(yǎng)液）。
37 ℃、5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng) 24h 后小心吸去上清，加入 80μL 新鮮培養(yǎng)液
和 20μL MTT 溶液（5 mg/mL），并繼續(xù)培養(yǎng) 4h。
吸掉上清，每孔加入 150μL DMSO，置搖床上低速振蕩 10 min，使結(jié)晶物充分溶解。在酶標儀 490 nm 處測量各孔的 OD 值。
計算細胞生長抑制率%
實驗組OD值-空白組OD值
＝1- ´100% 對照組OD值-空白組OD值
三、 實驗結(jié)果
藥物濃度 | 1mM | 2mM | 3mM | 4mM | 5mM |
OD 值 | 0.648678 | 0.651091 | 0.714305 | 0.777446 | 0.797002 |
0.672702 | 0.712622 | 0.760024 | 0.783670 | 0.780728 | |
0.678589 | 0.733039 | 0.778568 | 0.806155 | 0.772555 | |
0.653876 | 0.699670 | 0.739670 | 0.778650 | 0.776490 | |
0.628845 | 0.687968 | 0.777404 | 0.758746 | 0.799384 | |
均值 | 0.656538 | 0.696878 | 0.753994 | 0.780933 | 0.785232 |
細胞生長抑制率 % Mean±SD | 23.87±1.99 | 18.76±3.06 | 11.51±2.72 | 8.10±1.70 | 7.55±1.22 |
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